警告 TRIZOL 试剂含有的成分具有毒性、腐蚀性和刺激性，如果处理不慎会有危害健康。请在通风橱里操作，并穿好实验服、戴好手套和安全眼镜。避免直接接触，会导致皮肤、眼睛或者呼吸道等暴露部位的化学灼伤。如果万一接触了皮肤或者眼睛，请立即用大量水冲洗15min，必要时去医院护理。如果吸入了气体，立刻到通风地方呼吸新鲜空气，必要时去医院护理。
简介：
TRIZOL 是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。为单一相的溶液，含有异硫氰酸胍和酸性酚。是一种完全的即用型试剂，可用于提取高质量的总RNA或者从各种生物样本中同时提取RNA、DNA和蛋白质。这种酚和异硫氰酸胍单相溶液，可用于提取人、动物、植物、酵母或细菌来源的细胞和组织样本中的纯RNA、DNA和蛋白质，只需一个小时即可完成。它能快速地裂解细胞，让RNA释放至溶液中，同时试剂中含有的异硫氰酸胍和酚可快速失活各种核酸酶，保护RNA不发生降解，加入氯仿离心后裂解液分离成水相和有机相。 RNA 存在于水相。水相转移后，RNA 通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，样品中 DNA 和蛋白质可通过相继沉淀回收。用乙醇沉淀可从中间相得到 DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。提取的总RNA可用于cDNA合成、RT-PCR、Northern Blot、Dot blot、Primer Extension、Poly A RNA筛选、体外翻译或其他基因工程用途。
所需要准备的试剂：
• 氯仿
• 异丙醇
• 75% 酒精(溶于 DEPC 处理的水中)
• 无 RNase 的水或 0.5% SDS 溶液 （RNase-free 水的准备：把水加入到 RNase-free 的玻璃瓶中，加入 diethylpyrocarbonate (DEPC)至 0.01% (v/v). 静置过夜，高压蒸汽灭菌。SDS 溶液必须使用 DEPC 处理的水，并高压灭菌。
• 低温高速离心机(12,000xg)
操作步骤：
1、根据样品的类型，在室温（冰浴更佳）下，选择下面合适的处理方法，样品的体积请勿超过加入Trizol的10%，否则会引起裂解不充分，导致DNA污染RNA。
（1）组织匀浆或研磨
用匀浆器匀浆组织样品，每50~100mg组织加1ml Trizol。如果裂解物中，未研碎的组织过多，12000rpm离心3分钟，再取上清继续操作后续步骤。
（2）单层生长的贴壁细胞
吸掉培养基，用无菌的PBS液或Hank’s液轻轻冲洗后，弃掉上清，直接往培养瓶或培养板中加入1ml Trizol，用移液器或滴管吹打均匀。根据培养板的面积决定所需的Trizol的量，每10cm2加1ml Trizol。
（3）悬浮生长的细胞
离心收集细胞，弃掉培养基；用无菌的1×PBS液或Hank’s液洗涤一次，离心后弃掉上清，加入1ml Trizol，用移液器吹打均匀。
2、将裂解的样品在室温下孵育5分钟，使核蛋白体完全分离。
3、1 ml Trizol 加0.2ml氯仿，盖紧样品管盖，用力摇晃15秒，室温孵育2~3分钟，看到有明显的分层。
4、4℃，12000rpm离心15分钟，可见上层为无色透明液体，中间为一层薄薄的蛋白，下层为粉色液体。
5、小心吸取上层无色透明液体到一个新的1.5ml离心管，加入等体积异丙醇约为500ul，轻轻上下颠倒混匀，室温孵育15分钟。
6、4℃，12000rpm离心15分钟，可见一白色沉淀，即为RNA，弃掉上清。
7、加入1ml 75%乙醇，轻轻上下颠倒混匀，4℃，12000rpm离心5分钟，弃掉上清。
8、再重复一次步骤7。
9、室温干燥5~10分钟，加入30~100ul 的0.1% DEPC-H2O，用移液器吹打均匀，-20℃保存。因RNA保存后，极容易降解，为了给后续实验带来不必要的麻烦，建议立即进行后续实验。
下 游 分 析
1. OD测量
(1 ) 涡旋RNA样品， 吸取1-2µl RNA，用Buffer TE(10Mm Tris, pH7.0
1Mm EDTA) 稀释20-50倍，于紫外分光光度计测量230nm(盐)、260nm(核
酸)、280nm(蛋白)和320nm(不溶物或背景)的RNA浓度(ng/µl)= OD260 x
40 x 稀释倍度；
（2） RNA的理想的纯度：OD260/OD280=1.8-2.1，OD260/OD230 =1.8-2.5；
若320nm有较高的读数，则OD230、OD260和OD280必须都减去
OD320nm后，再进行计算。
2. 电泳分析；
取0.5µg RNA上样于1.0%琼脂糖凝胶，5V/cm电泳15-30分钟。
3. DNA污染的去除；
TRIZOL可去除95-99%的基因组DNA污染。对于大多数的应用，如Northern杂交，Poly (A)富集等都无需进行处理。由于PCR敏感高，对单拷贝数的基因也都可能被扩增，若纯化的RNA是用于RT-PCR，我们建议必须使用DNase I消化，才能彻底去除DNA的污染。吸光值。
常见问题分析：
1、每 mg 组织或 1 × 106 培养的细胞 DNA 产量的估计
肝脏和肾脏：3-4 µg
骨骼肌、脑、胎盘：2-3 µg
培养的人、大鼠、小鼠细胞 (1×106)：5-7 µg
成纤维细胞：5-7 µg
2、抽提得率低
（1）样品匀化或裂解不完全。减少样品的量或增加Trizol的量。
（2）样品量太少。增加样品量。
3、A260/A280 比值<1.65
（1）样品匀浆化时所加的Trizol量太少。增加Trizol量。
（2）加入Trizol后样品没有在室温下放置5分钟。增加此步骤。
（3）吸取上层无色透明液体时，吸到了下层有机相。小心吸取，勿吸下层有机相。
（4）自己配置的DEPC-H2O不合格。
4、RNA降解
（1）从动物取下的组织没有立即进行抽提或冰冻保存。
（2）用于抽提的组织或RNA样品保存于-5~-20℃，而不是存放于-70℃~-80℃。
（3）细胞经胰酶过度消化。
（4）水溶液或试管污染有RNA酶。
（5）用于琼脂糖凝胶电泳的甲醛pH低于3.5。
5、DNA污染
（1）样品匀浆化时所加的Trizol量太少，裂解不完全。增加Trizol量。
（2）用于抽提的样品包含有机溶剂（例如，乙醇，DMSO），强缓冲液，或碱性溶液。
温馨提示：不可用于临床治疗。
保存条件：
TRIZOL室温运输。收到试剂后请放置2-8℃保存。保质期为一年。
