试剂盒组分
Buffer DP | 30 ml |
Buffer DW2 | 20 ml |
Elution Buffer | 10ml |
DNA Mini Column I | 50 |
2 ml Collection Tube | 50 |
准备事项
在 Buffer DW2 中，加入 4 倍体积的无水乙醇，并于室温保存。
实验步骤
1. 短暂离心 PCR 产物或酶促反应产物。
2. 用移液枪测量其体积，并转移至灭菌的 2ml 离心管中。
3. 加入适量体积的 Buffer DP 至产物中，涡旋混匀 15 秒。
3.1. 回收>100bp 片段：加入 3 倍体积 Buffer DP 至产物中；
3.2. 回收<100bp 片段：加入 3 倍体积 Buffer DP 和 1 倍体积异丙醇至产物中；
4. 短暂离心收集管壁上的液滴。
5. 将 DNA 柱子套在收集管中。把混合液转移至柱子中。10,000 × g 离心 15~60秒。
6. (可选：混合液>750µl) 倒弃滤液，把柱子套回收集管中。把剩余的混合液转移至柱子中。10,000 × g 离心 15~60 秒。
7. 倒弃滤液，把柱子套回收集管中。加入 500µl Buffer DW2（已用无水乙醇稀释）至柱子中。 10,000 × g 离心 15~60 秒。
8. (可选)倒弃滤液，把柱子套回收集管中。加入 700µl Buffer DW2（已用无水乙醇稀释）至柱子中。 10,000 × g 离心 15~60 秒。
9. 倒弃滤液，把柱子套回收集管中。10,000 x g 离心1分钟。
10. 把柱子套在 2ml 离心管中， 加入 7-30µl Elution Buffer 至柱子膜中央。静置 1 分钟。10,000 × g 离心 1 分钟。DNA Mini Column 最少洗脱体积为 15µl。若需要获得最高产量，建议重复第 9 步进行第二步洗脱。
11. 丢去柱子，把 DNA 保存于-20℃
