Material | Amount | Storage | Stability |
Cat no. CMM002 Mycoplasma PCR Detection Kit | The product is stable for at least one year when stored as directed. | ||
2X PCR Master Mix (Component A) | 450 μL | -20 ℃ Avoid repeated freeze-thaw cycles | |
Positive Control (Component B) | 40 μL | ||
The Mycoplasma PCR Detection Kit 含有特定引物，能特异扩增支原体基因组的 rDNA 保守序列，可检测细胞培养过程中常见的多种支原体，如 M. arginini、M. arthritidis、M. bovis、M. hominis、M. fermentans、M.genitalium、
M. hyorhinis、M. neurolyticum、M. orale、M. pirum、M. pneumoniae、M. pulmonis、M. salivarium 和
U. Urealyticum，本试剂盒能检测包括以上常见支原体在内的50多种支原体。受支原体污染的样品可通过 260-280
bp 的 PCR扩增产物识别.
Protocol Overview:
使用 PCR 管: 取 2-5 µL 细胞培养物，以纯水稀释10 倍。取 2-6 µL 稀释后的细胞培养物 (相当于 0.2- 0.6 µL 原始培养物) 作为待检样品。
使用 1.5 mL 离心管：转移 50 µL 细胞培养物至 1.5 mL 离心管，盖紧离心管盖，95°C 温育 5-10 min；温 育后，以纯水稀释 10 倍，12,000 rpm 离心 2 min 使变性蛋白沉淀。取 2~6 µL 上清液 (相当于 0.2-0.6 µL 原始培养物) 作为待检样品。
提醒：
如取样对象为悬浮细胞，无需从培养基中去除细胞。
以 20 µL 体系进行 PCR 时，建议细胞培养物原液（PCR 模板）不超过 1 µL。当样品浓度过高时，培养基中 的血清蛋白或其他组分将抑制 PCR 反应，影响结果的准确性。
95°C 温育的待检样品可在 4°C 条件下储存 1~2 个月。
反应体系:
| 反应液组份 | 阴性对照 | 阳性对照 | 待检样品 |
| PCR Master Mix | 9 μL | 9 μL | 9 μL |
| 样本 或 Positive Control | - | 2 μL | 2 μL |
| Primer Mix | 9 μL | 9 μL | 9 μL |
| Ultrapure Water | 2 μL | - | - |
| 终体积 | 20ul | 20ul | 20ul |
PCR程序:
| 循环数 | 步骤 | 温度 | 时间 |
| 1 | 预变性 | 94°C | 5 min |
| 40 | 变性 | 94°C | 15 sec |
| 退火 | 55°C | 20 sec | |
| 延伸 | 72°C | 20 sec | |
| 1 | 保温 | 72°C | 2 min |
最后,取5-10 μL的PCR 产物，以 2%-3%琼脂糖凝胶电泳进行分析。
